Chymotrypsin Alpha TLCK Treated Sequencing Grade

La chymotrypsine alpha est une sérine endopeptidase (EC 3.4.21.1) issue du pancréas bovin. Elle catalyse préférentiellement l’hydrolyse des liaisons peptidiques impliquant les résidus aromatiques L-tyrosine, L-phénylalanine et L-tryptophane. Elle agit également sur les amides et esters d’acides aminés sensibles, ainsi que sur certaines liaisons impliquant des résidus leucyl, méthionyl, asparaginyl et glutamyl. La qualité Sequencing Grade correspond à une préparation trois fois cristallisée, traitée par le TLCK (1-chloro-3-tosylamido-7-amino-2-heptanone) afin d’inhiber spécifiquement toute activité trypsique résiduelle. Cette étape permet d’améliorer la spécificité protéolytique lors des applications analytiques. Après traitement, l’enzyme est dialysée contre une solution d’HCl 1 mM pour éliminer les produits d’autolyse et les contaminants de faible poids moléculaire. Elle est ensuite lyophilisée et conditionnée en flacons à haute récupération de 25 µg ou 100 µg, adaptés aux protocoles de digestion protéique en vue de séquençage ou d’analyses structurales. L’unité d’activité est définie comme la quantité d’enzyme hydrolysant une micromole de benzoyl-L-tyrosine éthyl ester par minute à 25°C, pH 7,8, en présence de calcium. Une activité de 45 unités par mg selon cette définition correspond à 10 000 unités de densité optique ou 1330 unités N.F. par mg en utilisant l’ATEE comme substrat. L’enzyme est fournie sous forme lyophilisée et doit être conservée entre 2 et 8°C.