Deoxyribonuclease I DPRF

La Deoxyribonuclease I DPRF est une DNase I d’origine pancréatique bovine (EC 3.1.21.1). Cette endonucléase hydrolyse les liaisons phosphodiester de l’ADN, préférentiellement adjacentes aux nucléotides pyrimidiques, générant des fragments polynucléotidiques présentant un groupement hydroxyle libre en position 3’ et un groupement phosphate en position 5’. La longueur moyenne des fragments obtenus lors d’une digestion limite correspond à un tétranucléotide. Les codes DPRF et DPRFS sont spécifiquement développés pour les applications de biologie moléculaire et présentent des niveaux particulièrement faibles d’activités ARNase et protéase. Ils sont adaptés aux protocoles nécessitant l’élimination de l’ADN tout en préservant l’intégrité des ARN ou des protéines structurales et enzymatiques. Les applications documentées incluent la traduction par coupure (« nick translation »), la cartographie d’ADN, l’isolement d’ARN et de protéines nucléaires, la synthèse de sondes ARN par ARN polymérase et les analyses de type RT-PCR. En culture cellulaire, la DNase est utilisée pour digérer l’ADN libéré par des cellules endommagées afin de réduire la viscosité des suspensions cellulaires et d’éliminer les fragments d’ADN associés aux membranes. Lorsqu’elle est correctement conservée, la DNase I Worthington est stable pendant 2 à 3 ans. Pour un stockage prolongé après reconstitution, le produit peut être dissous dans l’eau ou dans un tampon de pH compris entre 4,0 et 9,0 (à l’exception des tampons phosphate). L’ajout de 50 % de glycérol permet un stockage à -20 °C à l’état liquide. Il est recommandé d’aliquoter en fractions à usage unique et de limiter à un seul cycle de congélation-décongélation.